Kit PCR Langsung Sang

Amplikasi cepet saka target gen langsung nggunakake getih minangka template tanpa ekstraksi.

Kit iki nggunakake polimerase DNA anti-penghambat rekayasa genetik kanthi efisien kanggo nambah gen salinan siji ing genom manungsa. Sistem buffer sing dioptimalake kanthi apik ing kit iki mbantu polimerase nolak hambatan penghambat PCR, mula bisa langsung nambah DNA nggunakake getih lan sel budaya minangka template. Produk iki gampang dioperasikake lan ora mbutuhake langkah-langkah rumit kayata pemurnian DNA utawa conto pretreatment.
Kit iki diwenehake minangka 2 × MasterMix, lan reaksi kasebut bisa ditindakake kanthi mung nambah template getih lan primer deteksi sing cocog. Iki bisa ditrapake ing sel mamalia sing dibudidayakake kayata manungsa, tikus, babi, sapi lan spesies liyane, uga getih seger utawa 4 ℃ cryopreserve, anticoagulan (EDTA, sitrat, heparin), pembekuan getih cair lan bintik getih garing disimpen ing kertu komersial Whatman 903 lan FTA Elute.

Kucing Ora	Ukuran Kemasan
4992529	20 ×l × 100 rxn
4992530	20 ×l × 500 rxn

Kirim email menyang kita

Detail Produk

Tuladha Eksperimen

FAQ

Tag Produk

Fitur

■ Sederhana lan cepet: amplifikasi PCR bisa langsung ditindakake kanthi nggunakake cithakan getih, tanpa prelu langkah-langkah nyiapake conto lan ekstraksi DNA.
■ Kemurnian dhuwur: Nglewati conto pre-treatment lan langkah ekstraksi DNA bisa mbantu nyegah kontaminasi silang saka sampel.
■ Output dhuwur: Identifikasi PCR kanggo conto skala gedhe bisa ditindakake kanthi nggabungake kit karo piring PCR sumur 96/384.
■ Universalitas sing kuat: Kit iki kanthi efisien bisa nambah fragmen utawa fragmen GC kanthi struktur sekunder sing kompleks, lan dawa amplifikasi bisa nganti 5 kb.
■ resistensi stres sing kuat: kit iki bisa ditrapake kanggo macem-macem spesies lan conto getih sing dijaga kanthi macem-macem cara.

Aplikasi

Produk PCR saka kit iki ngemot "A" ing mburi 3', sing bisa digunakake langsung kanggo kloning vektor TA. Kit iki bisa digunakake kanggo nggedhekake fragmen DNA genom, analisis genetik sing ngasilake dhuwur lan analisis genotipe (kayata deteksi gen).

Kabeh produk bisa disesuaikan kanggo ODM / OEM. Kanggo rincian,monggo klik Layanan Khusus (ODM / OEM)

Sedurunge: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Sabanjure: Kit PCR Direct Tissue

	Nggunakake antikoagulasi EDTA manungsa minangka cithakan, 4 gen kanthi macem-macem konten GC ditambah karo Kit PCR Langsung Darah. Sistem reaksi PCR yaiku 20 μl, lan getih 1 μl digunakake minangka cithakan. M: TIANGEN Marker II; 1: Ukuran fragmen 1090 bp, konten GC 68,1%; 2: Ukuran fragmen 1915 bp, konten GC 70,4%; 3: Ukuran fragmen 448 bp, konten GC 74,8%; 4: Ukuran fragmen 1527 bp, konten GC 61,5%. Asil eksperimen: Kit Langsung PCR Darah bisa nambah fragmen DNA kanthi konten GC kanthi kisaran 61,5% -74.8%, nuduhake yen bisa nambah fragmen GC sing dhuwur.
	Nggunakake antikoagulasi EDTA manungsa minangka template, 5 gen kanthi dawa sing beda (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 lan Hn4.0) ditambah karo Kit PCR Langsung Darah. Sistem reaksi PCR yaiku 20 μl, lan getih 1 μl digunakake minangka cithakan. M: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 conto getih sing beda; NTC: kontrol tanpa primer. Asil eksperimen: Kit Langsung PCR Darah bisa nambah fragmen kanthi dawa nganti 4 kb, nuduhake yen bisa nambah fragmen dawa.
	Nggunakake antikoagulasi EDTA manungsa minangka template, Kit Langsung PCR Kit digunakake kanggo ndeteksi PCR macem-macem conto getih. Sistem reaksi PCR yaiku 20 μl, lan getih 1 μl digunakake minangka cithakan. M: TIANGEN Marker II; 1-9: jumlah pembebanan getih yaiku 0,1 μl, 0,2 μl, 0,3 μl, 0,4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl lan 5 μl, masing-masing; NTC: kontrol tanpa template Asil eksperimen: Kit Langsung PCR Darah duwe resistensi getih sing kuat lan bisa nambah sampel getih kanthi kisaran pemuatan 0,1-5 μl.
	Sampel getih saka manungsa, tikus, pitik lan spesies liyane kanthi perawatan beda digunakake minangka template. Darah PCR Kit Langsung digunakake kanggo nambah PRNP (manungsa, 750 bp), Actin (tikus, 200 bp), lan β-Actin (Ayam, 1,0 kb). Sistem reaksi PCR yaiku 20 μl, lan getih 1 μl digunakake minangka cithakan. M: TIANGEN Marker II. Asil eksperimen: Kit Langsung PCR Darah bisa ditrapake ing macem-macem conto, lan deteksi PCR langsung bisa ditindakake ing conto getih saka macem-macem spesies kanthi perawatan sing beda.

P: Ora ana band penguat

Cithakan A-1

■ Cithakan kasebut ngemot impurities protein utawa inhibitor Taq, lsp. --—Cithakan DNA murni, mbusak kotoran protein utawa ekstrak DNA template kanthi kit pemurnian.

■ denaturasi template ora lengkap ——Menakake nambah suhu denaturasi lan nambah wektu denaturasi.

■ Cithakan degradasi ——Siapake maneh cithakan.

A-2 Utami

■ Kualitas sepisanan sing kurang apik ——Rancang maneh sintesis primer.

■ Kerusakan primer ——Klik primer konsentrasi dhuwur dadi volume cilik kanggo dijaga. Supaya ora ana beku lan cair utawa jangka panjang 4 ° C.

■ Desain primer sing ora bener (kayata dawa primer ora cukup, dimer sing dibentuk ing antarane primer, lsp) -Resign primer (aja nganti pembentukan primer dimer lan struktur sekunder)

A-3 Mg²⁺konsentrasi

■ Mg²⁺ konsentrasi kurang banget ——Benerake nambah Mg²⁺konsentrasi: Ngoptimalake Mg²⁺ konsentrasi dening serangkaian reaksi saka 1 mM nganti 3 mM kanthi interval 0,5 mM kanggo nemtokake Mg optimal²⁺ konsentrasi kanggo saben template lan sepisanan.

A-4 Suhu penyemprot

■ Suhu anil sing akeh mengaruhi ikatan primer lan template. —— Ngurangi suhu anil lan ngoptimalake kondhisi kanthi gradien 2 ° C.

A-5 Wektu ekstensi

■ Wektu extension cekak —— Tambah wektu extension.

P: Positif salah

Fenomena: Sampel negatif uga nuduhake band urutan target.

Kontaminasi A-1 saka PCR

■ Kontaminasi salib saka urutan target utawa produk amplifikasi —— Ati-ati aja pipet conto sing ngemot urutan target ing sampel negatif utawa tumpahake metu saka tabung empar. Reagen utawa peralatan kudu dikonfigurasi kanthi otomatis kanggo ngilangi asam nukleat sing ana, lan anané kontaminasi kudu ditemtokake liwat eksperimen kontrol negatif.

■ Kontaminasi Reagen --— Ngatur reagen lan simpen ing suhu sithik.

A-2 Perdanar

■ Mg²⁺ konsentrasi kurang banget ——Benerake nambah Mg²⁺ konsentrasi: Ngoptimalake Mg²⁺ konsentrasi dening serangkaian reaksi saka 1 mM nganti 3 mM kanthi interval 0,5 mM kanggo nemtokake Mg optimal²⁺ konsentrasi kanggo saben template lan sepisanan.

■ Desain primer sing ora bener, lan urutan target duwe homologi kanthi urutan non-target. ——Desain desain ulang.

P: Amplikasi non-spesifik

Fenomena: Pita amplifikasi PCR ora salaras karo ukuran sing diarepake, gedhe utawa cilik, utawa kadang band amplifikasi spesifik lan band amplifikasi non-spesifik.

A-1 Primer

■ Kekhususan primer sing kurang apik

——Desain desain ulang.

■ Konsentrasi primer dhuwur banget ——Benerake nambah suhu denaturasi lan nambah wektu denaturasi.

A-2 Mg²⁺ konsentrasi

■ Ibu²⁺ konsentrasi dhuwur banget —— Ngurangi konsentrasi Mg2 + kanthi bener: Ngoptimalake Mg²⁺ konsentrasi dening serangkaian reaksi saka 1 mM nganti 3 mM kanthi interval 0,5 mM kanggo nemtokake Mg optimal²⁺ konsentrasi kanggo saben template lan sepisanan.

A-3 Polimerase paling apik

■ Jumlah enzim sing akeh banget —— Ngurangi jumlah enzim sing cocog kanthi interval 0,5 U

A-4 Suhu penyemprot

■ Suhu anil terlalu sithik —— Cocogake nambah suhu anilasi utawa nganggo metode anil rong tahap

Siklus PCR A-5

■ Siklus PCR banget —— Kurangi jumlah siklus PCR.

P: Pita tambel utawa smear

A-1 Primer——Khususan khusus —Rancang maneh primer, ganti posisi lan dawa sepisanan kanggo nambah kekhususan; utawa nindakake PCR susuh.

DNA Cithakan A-2

——Cithakan iku ora murni —— Purifikasi template utawa ekstrak DNA nganggo kit pemurnian.

A-3 Mg²⁺ konsentrasi

——Mg²⁺ konsentrasi dhuwur banget --— Nyuda nyuda Mg²⁺ konsentrasi: Ngoptimalake Mg²⁺ konsentrasi dening serangkaian reaksi saka 1 mM nganti 3 mM kanthi interval 0,5 mM kanggo nemtokake Mg optimal²⁺ konsentrasi kanggo saben template lan sepisanan.

A-4 dNTP

—— Konsentrasi dNTP dhuwur banget —— Ngurangi konsentrasi dNTP kanthi tepat

A-5 Suhu penyemprot

——Suhu anil sing sithik banget ——Menakake suhu annealing sing cocog

Siklus A-6

—— Akeh siklus --— Ngoptimalake nomer siklus

P: Pira template DNA sing kudu ditambahake ing sistem reaksi PCR 50 μl?

P: Kepiye cara nambah fragmen dawa?

Langkah pertama yaiku milih polimerase sing cocog. Polimerase Taq reguler ora bisa diowahi amarga ora ana kegiatan eksonuc please 3'-5, lan ora cocog bakal nyuda efisiensi ekstensi fragmen. Mula, polimerase Taq biasa ora bisa nambah fragmen target kanthi luwih gedhe tinimbang 5 kb. Taq polimerase kanthi modifikasi khusus utawa polimerase kesetiaan sing dhuwur kudu dipilih kanggo nambah efisiensi ekstensi lan nyukupi kebutuhan amplifikasi fragmen dawa. Kajaba iku, amplifikasi fragmen dawa uga mbutuhake penyesuaian desain primer, wektu denaturasi, wektu ekstensi, pH buffer, lsp. Biasane, primer kanthi 18-24 bp bisa nyebabake panen sing luwih apik. Kanggo nyegah kerusakan template, wektu denaturasi ing 94 ° C kudu dikurangi dadi 30 detik utawa kurang saben siklus, lan wektu paningkatan suhu nganti 94 ° C sadurunge amplifikasi kurang saka 1 menit. Kajaba iku, nyetel suhu ekstensi udakara 68 ° C lan ngrancang wektu ekstensi miturut tarif 1 kb / menit bisa njamin amplifikasi efektif fragmen dawa.

P: Kepiye cara nambah kesetiaan amplifikasi PCR?

Tingkat kesalahan amplifikasi PCR bisa dikurangi kanthi nggunakake macem-macem polimerase DNA kanthi kasetyan sing dhuwur. Antarane polimerase DNA Taq sing ditemokake nganti saiki, enzim Pfu nduweni tingkat kesalahan paling murah lan kasetyan paling dhuwur (deleng tabel sing dipasang). Saliyane pilihan enzim, peneliti luwih bisa nyuda tingkat mutasi PCR kanthi ngoptimalake kahanan reaksi, kalebu ngoptimalake komposisi buffer, konsentrasi polimerase termostable lan ngoptimalake nomer siklus PCR.

Tulis pesen sampeyan ing kene lan kirimake menyang kita